Виды ПЦР на гепатит В и расшифровка результатов

Гепатит В признается одним из самых опасных заболеваний печени, которое имеет много осложнений. Для выявления патологии проводится ряд диагностических методов. С их помощью определяется наличие заболевания, его стадия, степень распространения. Часто используется метод определения вирусной нагрузки при гепатите В.

Что это такое?

Вирусная нагрузка – общее количество генетического материала вирусных частиц, находящихся в крови у пациента. Данный показатель отражает активность размножения вируса гепатита С, что влияет на клиническую картину болезни и прогноз для больного человека.

Данный показатель очень важен для доктора, так как его определение позволяет подобрать индивидуальную схему терапии или же изменить ее при выявленной неэффективности. В клинической медицине данный показатель определяют с помощью различных методов, которые могут носить как качественный, так и количественный характер.

Важно отметить, что количество вирусной РНК (рибонуклеиновая кислота) в крови у больного косвенно отражает тяжесть поражения печеночной ткани, что следует учитывать врачу при интерпретации полученных результатов.

Вирусная нагрузка определяется посредством двух групп тестов: качественных и количественных:

  1. Качественное исследование — лечащий врач получает информацию только о наличии данного заболевания у больного. Данных об активности вирусных частиц и их количестве в крови пациента нет.
  2. Количественное определение — исследование дает информацию о количестве вирусного генетического материала в крови. Особенно часто это используется при терапии с применением интерферонов и Рибавирина. Также возможность прогнозировать течение заболевания применяется у людей с длительно текущим вирусным гепатитом С и при необходимости оценивания рисков ремиссии болезни.

Вирусная РНК гепатита С

Современные диагностические методы, получившие бурное развитие в последние десять лет, позволяют определить генетический материал вируса, а именно РНК в крови больного. Проводить подобную процедуру стоит после установления факта наличия заболевания с помощью других методов, например, с помощью использования иммуноферментного анализа с определением титра антител.

Существует три метода для определения количества вирусных частиц:

  • полимеразная цепная реакция (ПЦР) позволяет определить даже небольшое количество РНК вируса гепатита. Минимально определяемая концентрация – 50 МЕ/мл. МЕ – международная единица, разработанная специалистами по диагностике и лечению вирусного гепатита С. При положительных результатах ПЦР-исследования подтверждается установленный диагноз, а также подбирается тактика лечения и необходимый спектр терапевтических мероприятий;
  • при необходимости массового обследования людей на вирусную нагрузку гепатита С может использоваться способ разветвленной ДНК. Чувствительность метода в десять раз меньше чем у обычной ПЦР и достигает 500 МЕ/мл. Однако, несмотря на возможность ложных отрицательных результатов, метод разветвленной ДНК продолжает использоваться в качестве скринингового анализа популяции;
  • технология транскрипционной амплификации является наиболее чувствительным методом, позволяющим определить уровень вирусной нагрузки при ее значениях около 5 МЕ/мл. Подобная процедура проводится во многих лечебных учреждениях и не требует больших финансовых ресурсов, что объясняет ее популярность среди врачей и пациентов.

Важно отметить, что выбирать конкретный метод обследования пациента должен специалист, основываясь на имеющейся клинической картине, эффективности проводимого лечения и результатах проведенных раньше методов обследования.

Подготовка к обследованию

Для определения наличия ВГВ методом ПЦР делается анализ крови из вены. Процедура всегда проводится строго натощак и лучше всего попасть в лабораторию утром, когда естественное время отдыха от пищи составит 8 часов. Чтобы результаты обследования получились верными, необходимо узнать заранее, как подготовиться к походу в клинику правильно. Дополнительные этапы таковы:

  1. Отказ от жирной пищи, курения, спиртного и занятий спортом за 12 часов до процедуры.
  2. Отдых в течение 20 минут непосредственно перед сдачей крови.
  3. Перед началом процедуры необходимо предупредить медсестру о принимаемых медикаментах.
Подготовка к обследованию

Внимание! Если диагностика проводится ребенку младше 5-ти лет, то за полчаса до процедуры его нужно поить кипяченой водой по 1 стакану через каждые 10 минут.

Пределы вирусной нагрузки при гепатите

Опасная вирусная нагрузка

Насколько больной человек опасен для окружающих определяет концентрация вирусных РНК в организме. Этот показатель также дает ответ на вопрос, насколько эффективным будет медикаментозное лечение. Потому, если обнаружено совсем небольшое число РНК,можно судить о скором выздоровлении человека.

Вирус гепатита С (HCV, ВГС)

Возвращаясь к результатам с высокой вирусной нагрузкой, отметим, — такой показатель может привести к осложнениям, которые затронут все внутренние органы, а не только печень. Чтобы побороть вирус в активной фазе, когда продолжается заражение здоровых клеток, больному назначают длительный курс комплексной терапии. На протяжении лечения пациент периодически должен проходить тест на определение вирусной нагрузки, чтобы медики были в курсе эффективности одних средств и неспособности противостоять заболеванию других. В соответствии с результатом теста лечение должно корректироваться. Если тест показал положительную динамику и количество РНК уменьшилось, лечение сокращают или переводят пациента на поддерживающую терапию. Безусловно, тест на вирусную нагрузку не может дать объективной картины состояния больного, поэтому должен проводиться в комплексе с другими анализами и диагностическими мерами.

Читайте также:  Как восстановить кишечник после антибиотиков взрослому

Строение вируса гепатита СЖизненный цикл вируса гепатита С

Подготовка к сдаче крови

Для подсчета количества частиц вируса гепатита С (ВГС) исследуют кровь, взятую из локтевой вены. Забор образцов для ПЦР-диагностики выполняют в процедурном кабинете. При соблюдении правил антисептики исключается риск занесения инфекции в биоматериал извне. Выполнение всех процедурных условий предотвращает недостоверные результаты.

По данным исследования удается охарактеризовать вирусный процесс – определить активность возбудителя гепатита, специфичность иммунного ответа.

Сдаче крови предшествует несложная подготовка:

  1. за сутки отказываются от приема медикаментов;
  2. в день обследования ограничивают физические нагрузки;
  3. за 8 часов исключают прием пищи и красящих напитков;
  4. анализ сдают до полудня натощак;
  5. перед входом в процедурный кабинет необходимо спокойно посидеть 15-20 минут.

Погрешности в результатах анализа чаще всего связаны с:

  • неправильным хранением биоматериала;
  • приемом лекарств перед забором крови;
  • допущением ошибки лаборантами.

При необходимости повторного проведения ПЦР-диагностики кровь сдают в той же лаборатории.

Для ПЦР-анализа на гепатит С собирают венозную кровь. Обычно из вены пациента за один раз берут две порции крови: первую отправляют на ПЦР, а вторую на ИФА. Это делают для того чтобы более точно оценить, насколько сильно пациент заражен вирусом, и как иммунитет борется с ним.

Обычно от пациента требуют соблюдения следующих правил:

  • анализ крови сдают с утра;
  • перерыв между последним приемом пищи и сдачей крови должен составлять восемь-десять часов;
  • за два-три дня до анализа нужно отказаться от жареной и жирной пищи, и алкоголя;
  • в течение двадцати четырех часов перед анализом пациент должен избегать физических нагрузок: не переносить тяжестей, не посещать спортзал или бассейн.

Вирусная нагрузка при гепатите С

Вирусная нагрузка — это показатель, который отражает концентрацию вируса гепатита С в крови. Он определяется при помощи анализа, проводящегося по методике ПЦР, синонимом является РНК ВГС или RNA HCV.

Для чего нужно знать о вирусной нагрузке при гепатите С

  • Во-первых, на основании выявления вируса в крови устанавливают сам диагноз.
  • Во-вторых, при остром гепатите С изменение концентрации вируса в крови, в течение полугода, позволяет определить произошло ли выздоровление или болезнь приняла хроническое течение.
  • В-третьих, наблюдение за вирусной нагрузкой при лечении хронического гепатита позволяет оценить эффективность терапии.
  • В-четвертых, вирусная нагрузка при гепатите С, в ряде случаев, может повлиять на продолжительность лечения. Так например вирусная нагрузка менее 6 миллионов МЕ/мл при хроническом гепатите С, генотип 1, при отсутствии цирроза, позволяет сократить курс лечения с 12 до 8 недель.

Является ли высокая вирусная нагрузка плохим прогностическим фактором

В ряде исследований не было получено убедительных данных о том, что величина вирусной нагрузки при гепатите С может стать предвестником осложнений или того, что вирус будет устойчив к препаратам.

Вирусная нагрузка при гепатите С

Но со стороны здравого смысла, чем меньше сопротивление вирус встречает со стороны иммунной системы, тем легче ему размножаться, то есть, — тем выше будет концентрация вируса в крови.

Тем не менее нет доказательств того, что это влияет на прогноз.

Как часто следует определять вирусную нагрузку при гепатите С

При остром гепатите С требуются повторные анализы с интервалом 3-6 месяцев в течение года, для того чтобы убедиться в том, что произошло выздоровление. Об излечении говорят в тех случаях, когда РНК вируса не определяется в крови через 6 месяцев от постановки диагноза.

При хроническом гепатите, определение нагрузки проводится после окончания курса лечения и далее так же как и при остром гепатите С через 3 и 6 месяцев.

Значение концентрации вируса

Чем больше содержание вируса в крови человека, тем он опаснее для окружающих своей заразностью. Эффективность лечения зависит от того, как удается снизить количество вируса. Этот критерий учитывается для прогноза выздоровления.

Комбинацию лекарственных средств подбирают для максимального воздействия на вирусПри высокой вирусной нагрузке в течение длительного времени возникает риск поражения не только печени, но и всего организма, повышается вероятность осложнений.

Значение концентрации вируса

Содержание возбудителя проверяют в динамике. Если удается уменьшить вирусную нагрузку, то медикаменты считаются эффективными, можно переводить больного на поддерживающие дозировки. При отрицательной динамике анализа необходима корректировка дозы или замена препаратов. Общую оценку состояния пациента дает одновременное сопоставление с результатами клинических и биохимических тестов.

Читайте также:  Симптомы и лечение острого токсического гепатита

Для первого исследования необходим недельный срок. Динамика повторных анализов проводится спустя месяц. При положительном анализе на антитела у людей без симптомов болезни необходимо повторять исследование вирусной нагрузки ежегодно.

Диагностика

В отличие от других патогенных агентов, вирус гепатита С обладает способностью к мутации. Всего учеными было насчитано более 9 штаммов, каждый из которых имеет свои особенности и создает по 3-4 новых генотипа. Поэтому иммунитет просто не успевает вырабатывать тактику борьбы с ними, что становится причиной быстрого прогрессирования болезни и невозможности избавиться от нее медикаментозным путем.

Генетический материал вируса заключен в РНК, который содержится в его ядре. Количественный подсчет патологических микроорганизмов осуществляется только тогда, когда уже был поставлен точный диагноз (было проведено полное обследование) и требуется установить форму болезни. Чем выше данный показатель, тем быстрее прогрессирует заболевание.

Если наблюдается незначительное превышение вирусной нагрузки при гепатите С от нормы, то это тоже считается неблагоприятным прогнозом. В этом случае рекомендуется сдавать повторный анализ через 2-3 недели, дабы убедиться в правильности подобранного лечения. Чтобы определить количество РНК в крови больного, применяют иммунологические методы. При их проведении используются специальные реактивы, которые позволяют выявить специфические антитела.

Данный диагностический метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при условии его низкого содержания в крови, благодаря чему удается поставить диагноз уже спустя 5 дней с момента заражения, то есть, задолго до того, как организм начнет вырабатывать антитела и появятся первые симптомы. Если исследование биологического материала методов ПЦР дает положительные результаты, то это говорит о присутствии инфекции и необходимости проведения соответствующей терапии.

Однако, в некоторых случаях, полученные данные могут быть недостоверными. Происходит это в следующих случаях:

  • загрязненность биологического материала, что часто отмечается при нарушении санитарных норм;
  • прием больным некоторых препаратов, влияющих на состав крови (например, гепарина, активизирующего антитромбин II);
  • наличие в исследуемой жидкости химических/белковых субстанций.

Данный тест позволяет обнаружить количество РНК в крови больного, то есть, определить степень вирусной нагрузки при гепатите С. Выражают ее в цифровом эквиваленте, измеряют в МЕ/мл. Проводится анализ через каждые 3 недели, что позволяет оценить эффективность от лечения.

Согласно расшифровке данного теста, завышенными считаются результаты, превышающие 800 000 МЕ/мл, низкими – ниже 400 000 МЕ/мл. Если заболевание отсутствует, то молекулы РНК выявлены не будут.

Анализ проводится на голодный желудок. В качестве биологического материала выступает венозная кровь. Перед исследованием запрещается пить, употреблять еду и курить (минимум за 8 часов). За 24 часа до сдачи теста требуется избегать сильных физических и эмоциональных нагрузок.

Метод разветвленной ДНК

Это дешевый и устаревший способ диагностики заболевания, преимуществом которого является быстрота скорости проведения теста и возможность обследования сразу нескольких пациентов. Но у него есть один весомый недостаток.

Степень вирусной нагрузки при гепатите С в расшифровке анализа на начальных стадиях развития патологии отрицательная. Дело все в том, что данный метод ДНК позволяет обнаружить болезнетворных микроорганизмов в том случае, когда их количество достигает не менее 500 МЕ/мл. Поэтому прибегают к данному тесту только для документального подтверждения наличия болезни.

Основная суть данного исследования заключается в применении 2 нуклеотидных зондов. Первый связывают с вирусной РНК и фиксируют с искусственно созданной молекулой-усилителем. Второй помечают специальным красящим веществом, что обеспечивает получение определенного сигнала после вступления в связь с вирусом, который улавливается при помощи химической люминесценции.

Подготовка к этому анализу также подразумевает под собой отказ от еды, питья и курения за 8 часов до забора биологического материала. Нарушение этого правила может привести к получению недостоверных результатов.

Метод ТМА

Данный способ диагностики болезни является наиболее популярным, так как он позволяет определить степень вирусной нагрузки даже при минимальном его содержании в крови. Его суть напоминает 2 вышеописанных метода исследования. Он дает верные результаты в 98% случаях, стоит недорого, поэтому активно применяется для выявления гепатита С практически во всех клиниках.

Ультрачувствительный анализ

Тест используется для определения наличия вируса гепатита в кровотоке. Если он присутствует, то анализ может также измерить точное количество микроорганизмов. Другими словами это называется – вирусная нагрузка.

Тест может помочь врачу решить, как лучше всего лечить заболевание, чтобы снизить возможность вредных последствий. Периодически проводимые анализы показывают, как организм больного реагирует на определенные препараты. Результаты обычно доступны в течение нескольких дней или, самое большее, через две недели.

Существует два подхода к получению результатов: качественный и количественный.

Качественный ПЦР используется, для подтверждения того, что у больного в теле имеется вирус гепатита. Обычно он выполняется вторым, после теста на антитела. Указанный анализ позволяет узнать, производит ли организм специальные клетки для борьбы с инфекцией.

Количественный метод измеряет точное число возбудителей в крови, которое показывает, какова вирусная нагрузка на организм: высокая или низкая. Это полезно для контроля лечения через определенные промежутки времени. Измерение вирусной нагрузки не показывает, насколько серьезна инфекция или цирроз.

Читайте также:  Если после прививок от полиомиелита и АКДС поднялась температура

Недавно разработанный тест называется «цепная полимеразная реакция в реальном времени». Ультрачувствительный анализ предназначен для очень точного количественного определения РНК (генетического материала) вируса гепатита C (HCV) в крови человека.

Анализ имеет погрешность в 1000 копий захватчика на реакцию, с промежутком определения от ста до 100 миллионов. Данные свидетельствуют о высокой чувствительности теста, который выявляет патологию с точностью в 100%.

В данном случае результаты теста показывают, что у вас есть заболевание, когда на самом деле его нет. К сожалению, ложные срабатывания периодически случаются.

Для диагностики гепатита С используются два теста крови. Иммуноферментный анализ (ELISA) определяет наличие антител, которые организм произвел в ответ на инфекцию. Один из недостатков заключается в том, что он не может отличить активную форму болезни от хронической или перенесенной.

В таком случае проводится ПЦР анализ. Он ищет вирусы в кровотоке. Анализ стоит дороже и обычно проводится для подтверждения положительного теста на антигены.

Антитела, найденные в результате теста ELISA, могут быть вызваны инфекцией, отличной от гепатита С, что приводит к ложноположительному ответу. Это явление известно как перекрестная реактивность.

Люди, которые выздоравливают после гепатита С, могут также иметь ложноположительный результат. В редких случаях к этому приводит лабораторная ошибка. Ложноположительные результаты могут также возникать у новорожденных, у которых есть антитела против вирусов гепатита у матери.

Для подтверждения ответа первого теста, проводится анализ ПЦР, позволяющий обнаружить генетические материалы вирусов (ДНК или РНК). Частота ложных срабатываний небольшая и равна трем процентам от общего числа.

Данный тип анализа обычно проводится в домашних условиях или при срочной необходимости. Примером может служить «OraQuick HCV Rapid Antibody Test», используемый для обнаружения белков, которые производит организм для борьбы с инородными веществами.

Экспресс тест выпускают в виде кассет или полосок. Принцип их действия аналогичен, поэтому покупатель самостоятельно решает, какой ему выбрать. Главное, чтобы упаковка была целостной и тест приобретался в аптеке.

Образец крови человека добавляется в пробирку, содержащую тестируемые химикаты. Тест-полоску, покрытую специальными веществами – антигенами вируса гепатита, помещают во флакон.

При положительном результате появляется черта, которая указывает на наличие антител в крови больного. Точность анализа более 99%. Результат готов через 20 минут. Никакая дополнительная расшифровка результатов у специалиста не понадобится.

Метод ПЦР с применением гибридизационно-флуоресцентного исследования называется ультрачувствительным анализом (или ультра ПЦР).

Когда используется метод:

  • Если специалист, ведущий заболевание, обнаружил скрытые его формы;
  • При наличии антител к ВГС, не подтвержденных другим методиками;
  • Для подтверждения полного выздоровления после проведенной терапии;
  • Для выявления заболевания на ранней стадии при помощи скрининга.

При обычных вариантах исследования возможно получение ложного результата. Это случается, если образцы крови или оборудование загрязнено. Ультрачувствительный анализ позволяет избежать таких ситуаций и облегчить диагностику.

Найдено натуральное средство, вызывающее отвращение к алкоголю!

Елена Малышева: “Наверняка вам известно, что до недавнего времени единственным действенным средством для борьбы с алкогольной зависимостью было…”

Билирубин

Гемоглобин расщепляется в тканях печени и селезенки, благодаря этому появляется такое вещество как билирубин. Именно данный компонент является основой желчи. Билирубин может быть прямой и непрямой. При высокой концентрации прямого билирубина в крови, можно установить заражение гепатитом В или другими заболеваниями печени.

Высокая концентрация не прямого билирубина в крови говорит о синдроме Жильбера. Кроме того, большая концентрация любого билирубина сигнализирует о плохой проходимости желчных протоков. При заражении гепатитом моча становится темной, лицо и белки глаз приобретают желтый цвет.

Подготовка к сдаче крови

Для подсчета количества частиц вируса гепатита С (ВГС) исследуют кровь, взятую из локтевой вены. Забор образцов для ПЦР-диагностики выполняют в процедурном кабинете. При соблюдении правил антисептики исключается риск занесения инфекции в биоматериал извне. Выполнение всех процедурных условий предотвращает недостоверные результаты.

По данным исследования удается охарактеризовать вирусный процесс – определить активность возбудителя гепатита, специфичность иммунного ответа.

Сдаче крови предшествует несложная подготовка:

  1. за сутки отказываются от приема медикаментов;
  2. в день обследования ограничивают физические нагрузки;
  3. за 8 часов исключают прием пищи и красящих напитков;
  4. анализ сдают до полудня натощак;
  5. перед входом в процедурный кабинет необходимо спокойно посидеть 15-20 минут.

Погрешности в результатах анализа чаще всего связаны с:

  • неправильным хранением биоматериала;
  • приемом лекарств перед забором крови;
  • допущением ошибки лаборантами.

При необходимости повторного проведения ПЦР-диагностики кровь сдают в той же лаборатории.